Исследование микробов и бактерий. Методы исследования в микробиологии Исследование микроорганизмов

Медицинская микробиология

Микробиология - это раздел биологии, занимающийся изучением микроорганизмов, главным образом вирусов, бактерий, грибов (в особенности дрожжей), одноклеточных

Многие микробы патогенны для человека, животных и растений и являются причиной разнообразных заболеваний. Медицинская микробиология изучает пути распространения инфекции, чувствительность возбудителей инфекционных болезней к антибиотикам и механизмы их патогенного действия. В клинических лабораториях при обследовании больных обычно проводят высевание и культивирование патогенных микробов, чтобы их затем идентифицировать и подобрать эффективное лечение. Другое прикладное направление -промышленная микробиология (получение антибиотиков, использование микроорганизмов при обработке пищевых продуктов, предохранение материалов от порчи и разложения, облагораживание почвы, извлечение металлов из руд и промышленных отходов, разработка способов получения белка из нефти). Наконец, сельскохозяйственная микробиология специализируется на повышении плодородия почвы и предупреждении болезней сельскохозяйственных животных.

Метаболическая активность микроорганизмов очень высока: они осуществляют Фиксацию азота воздуха и тем самым повышают плодородие почвы; вносят основной вклад в фотосинтетическую продуктивность Мирового океана; разрушают органические отходы и продукты жизнедеятельности человека, обеспечивая их рециклизацию. Бактериологическая лаборатория и бактериологическое иссследование

Бактериологическая лаборатория - подразделение, выполняющее микробиологические исследования. Существуют клинические, санитарно-бактериологические, контрольные, ветеринарные, сельскохозяйственные, пищевые и другие бактериологические лаборатории.

Бактериологическое исследование - совокупность методов, применяемых для обнаружения и установления природы бактерий, выделенных от больных, бактерионосителей или из объектов окружающей среды. Бактериологическое исследование проводят с диагностической целью при инфекционных болезнях, а также при обследовании на бактерионосительство и определении санитарно-гигиенического состояния объектов окружающей среды.

Выбор материала для бактериологического исследования определяется целью исследования, биологическими свойствами микробов, условиями обитания их в исследуемом объекте, патогенезом заболевания (с учетом места наибольшей концентрации возбудителя и путей его выведения из организма). Так, при сепсисе или болезни, сопровождающейся бактериемией (например, при брюшном тифе), для обнаружения возбудителя берут кровь, при дизентерии - испражнения, при пневмонии - мокроту, при подозрении на анаэробную инфекцию - материал из глубоких слоев тканей и т. д. Успех бактериологического исследования в значительной степени зависит от правильности взятия материала и соблюдения определенной осторожности при его транспортировке. У больного материал для исследования рекомендуется брать до начала лечения химиотерапевтическими препаратами. Исследуемый материал собирают в стерильную посуду, соблюдая правила асептики, и в возможно короткие сроки доставляют в бактериологическую лабораторию. Транспортировку инфицированного материала производят в закрытой посуде, помещенной в специальные биксы, пеналы, чемоданы и т. д. К материалу, посылаемому для бактериологического исследования, прилагают сопроводительный документ, включающий следующие сведения: характер направляемого материала и дату его взятия, фамилию, имя, отчество, возраст и адрес больного, дату начала заболевания, предполагаемый клин, диагноз. Доставленный в лабораторию материал необходимо как можно быстрее исследовать.

Бактериологическое исследование материала начинается с его бактериоскопии. Исследование под микроскопом окрашенных мазков (бактериоскопический метод) позволяет в некоторых случаях идентифицировать возбудителя заболевания (например, микобактерии туберкулеза, гонококки). Однако возможности этого метода ограничены и его обычно используют как ориентировочный.

Основным методом бактериологического исследования является бактериологический метод, который заключается в выделении чистой культуры возбудителя (популяции, содержащей бактерии одного вида) и ее идентификации. Под идентификацией микроорганизмов подразумевают изучение их свойств с целью установления принадлежности к той или иной систематической группе (роду, виду). Бактериологический метод представляет собой многоэтапное исследование. В связи с тем, что исследуемый материал чаще на 18-24 ч. Посевы анаэробов помещают в анаэростат, откуда удаляют воздух и заменяют его газовой смесью без кислорода. 0 37°всего содержит смесь микроорганизмов, основой бактериологического метода является выделение чистой культуры возбудителя, которое производят на первом этапе исследования. С этой целью делают посев исследуемого материала, как правило, на плотные питательные среды, выбор которых обусловливается свойствами предполагаемого возбудителя. Применяют по возможности элективные среды, на которых растет только данный вид бактерий, или дифференциально-диагностические среды, позволяющие отличить предполагаемого возбудителя от других микроорганизмов. Например, для выделения дифтерийной палочки используют теллуритовые среды, при бактериологической диагностике кишечных инфекций - среду Эндо, висмут-сульфитный агар и т. д. При выделении условно-патогенных микроорганизмов посев материала производят на универсальные питательные среды, например кровяной агар. Все манипуляции, связанные с посевом и выделением бактериальных культур, осуществляют над пламенем горелки. Посев материала на питательные среды производят либо бактериальной петлей, либо стеклянным или металлическим шпателем таким образом, чтобы рассеять находящиеся в исследуемом материале бактерии по поверхности питательной среды, в результате чего каждая бактериальная клетка попадает на свой участок среды. При выделении чистой культуры возбудителя из патологического материала, в значительной мере загрязненного посторонней микрофлорой, иногда пользуются биологическим методом выделения чистой культуры: исследуемым материалом заражают чувствительных к возбудителю лабораторных животных. Так, при исследовании мокроты больного на содержание в ней пневмококков мокроту внутрибрюшинно вводят белым мышам и через 4-6 ч из их крови получают чистую культуру пневмококка. В том случае, если в исследуемом материале предполагается содержание малого количества возбудителя, для его накопления посев производят на жидкую питательную среду - среду обогащения (оптимальную для данного микроорганизма). Затем из жидкой питательной среды осуществляют пересев на плотные среды, разлитые в чашках Петри. Засеянную среду помещают в термостат обычно при 1

На втором этапе проводят исследование колоний бактерий, происходящих от одной бактериальной клетки и выросших на плотной питательной среде (колония и является чистой культурой возбудителя). Производят макроскопическое и микроскопическое исследование колоний в проходящем и отраженном свете, невооруженным глазом, с помощью лупы, под малым увеличением микроскопа. Отмечают культуральные свойства колоний: их величину, форму, цвет, характер краев и поверхности, консистенцию, структуру. Далее часть каждой из намеченных колоний используют для приготовления мазков, окрашивают мазки по Граму, микроскопируют, определяя морфологические и тинкториальные (отношение к окраске) свойства выделенной культуры и одновременно проверяя ее чистоту. Оставшуюся часть колонии пересевают в пробирки со скошенным агаром (или другой оптимальной для данного вида средой) с целью накопления чистой культуры для более полного ее изучения. Пробирки помещают на 18-24 ч в термостат. Кроме перечисленных исследований на втором этапе нередко подсчитывают количество выросших колоний. Особенно большое значение это имеет при заболеваниях, вызванных условно-патогенными микроорганизмами, так как в этих случаях судить о ведущей роли того или иного возбудителя можно лишь по содержанию его в патологическом материале в большом количестве и преобладанию над другой Флорой. Для проведения такого исследования готовят последовательные разведения исследуемого материала, из которых производят высев на чашки с питательной средой, подсчитывают число выросших колоний, умножают на разведение и таким образом определяют содержание микробов в материале.

Третий этап заключается в идентификации выделенной чистой культуры возбудителя и определении его чувствительности к антибиотикам и другим химиотерапевтическим препаратам. Идентификацию выделенной бактериальной культуры осуществляют по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным, токсигенным свойствам. Прежде всего делают мазок из культуры, выросшей на скошенном агаре, изучают морфологию бактерий и проверяют чистоту культуры бактерий. Затем производят посев выделенной чистой культуры бактерий на среды Гисса, желатин и другие среды для определения биохимических свойств. Биохимические, или ферментативные, свойства бактерий обусловлены ферментами, участвующими в расщеплении углеводов, белков, вызывающими окисление и восстановление различных субстратов. Причем каждый вид бактерий продуцирует постоянный для него набор Ферментов. При изучении антигенных свойств чаще всего используют реакцию агглютинации на стекле. Токсинообразование микробов определяют с помощью реакции нейтрализации токсина антитоксином in vitro или in vivo. В некоторых случаях изучают и другие Факторы вирулентности. Перечисленные исследования позволяютопределить вид или род возбудителя.

С целью выявления эпидемической цепочки заболевания, в том числе для обнаружения источника инфекции, осуществляют внутривидовую идентификацию бактерий, которая заключается в определении фаготипа (Фаговара), изучении антигенных и других свойств выделенных бактерий. Определение фаготипа - фаготипирование производят при стафилококковой инфекции, брюшном тифе, паратифе В. На чашку с питательной средой, засеянную с помощью шпателя (газоном) выделенной чистой культурой, наносят по капле различные диагностические фаги. Если культура чувствительна к данному фагу, наблюдается образование округлой формы участков разрушенных бактерий - так называемые бактериологического исследования негативные колонии (бляшки). Культура возбудителя может быть чувствительна к одному или нескольким фагам.

Для назначения рациональной химиотерапии в связи с широким распространением лекарственно-устойчивых форм бактерий необходимо определение антибиотикограммы -чувствительности или устойчивости выделенной чистой культуры возбудителя к химиотерапевтическим препаратам. С этой целью используют либо метод бумажных дисков, либо более точный, но громоздкий метод серийных разведений. Метод бумажных дисков основан на выявлении зоны подавления роста бактерий вокруг дисков, пропитанных антибиотиками. При применении метода серийных разведений антибиотик разводят в пробирках с жидкой питательной средой и засевают в них одинаковое количество бактер бактериологического исследования. Учет результатов проводят по отсутствию или наличию роста бактерий. Полученная антибиотикограмма может служить и эпидемиологическим целям для определения идентичности штаммов.

При выявлении бактерионосительства проводят повторные исследования, т. к. в одной порции материала можно не обнаружить возбудителя.

В настоящее время существуют ускоренные методы идентификации бактерий. Так, в нашей стране применяют СИБ (систему индикаторных бумажек), позволяющую быстро (через 6-12 ч.) и без использования большого числа питательных сред идентифицировать чистую бактериальную культуру. Для экспресс-диагностики инфекционных болезней широко используют иммунофлюоресцентный метод (см. Серологические исследования).

Из книги 1000 секретов женского здоровья автора Дениз Фоули

ГЛАВА 42 МЕДИЦИНСКАЯ ПОМОЩЬ Кто кроме вашего любимого так же хорошо знает ваше тело, как ваш врач? Кто еще видит вас в откровенных позах, полуобнаженной, в жару, страдающей от боли? Такие отношения, по меньшей мере, необычны для посторонних людей. И вы доверяете этому

Из книги Лечимся пиявками автора Нина Анатольевна Башкирцева

Медицинская пиявка Медицинская пиявка – это особая, породистая пиявка, резко отличающаяся от прудовой. Она выращивается именно для того, чтобы всего один раз послужить человеку. Пиявка используется как одноразовый шприц, который абсолютно стерилен. После процедуры

Из книги Я был бы счастлив, если бы не... Избавление от любого рода зависимостей автора Олег Фрейдман

Медицинская модель При этой форме лечения используют медикаментозные препараты (для химически зависимых наркоманов и алкоголиков к ним же относятся и различные варианты химических защит).В такой модели можно достичь стойкой ремиссии в течение некоторого времени, но

Из книги История медицины автора Е. В. Бачило

1. Медицинская символика, и ее значение История медицины – это наука о развитии, совершенствовании медицинских знаний, медицинской деятельности разных народов мира на протяжении всей истории человечества, которая находится в неразрывной связи с философией, историей,

Из книги Латинский язык для медиков автора А. И. Штунь

3. Медицинская терминология Современная медицинская терминология – это система систем, или макротерминосистема. Вся совокупность медицинских и парамедицинских терминов, как отмечалось, достигает нескольких сотен тысяч. План содержания медицинской терминологии очень

Из книги Медицинская физика автора Вера Александровна Подколзина

Из книги Скорая помощь. Руководство для фельдшеров и медсестер автора Аркадий Львович Верткин

Из книги Очищение. Том 1. Организм. Психика. Тело. Сознание автора Александр Александрович Шевцов

Из книги Чистотел и алоэ. Чудо-целители семьи автора Галина Анатольевна Гальперина

Слой 1. ПСИХИКА МЕДИЦИНСКАЯ Глава 1. Организм + психика = человек? Человек - это не организм. У человека есть тело, есть сознание и есть душа. Но если мы начинаем смотреть на себя физиологически, то душа пропадает, а появляется организм. Однако даже физиологи понимают, что

Из книги Военно-полевая хирургия автора Сергей Анатольевич Жидков

Медицинская и декоративная косметика Существует медицинская и декоративная косметика.Медицинская косметика предполагает использование различных косметических средств, проведение физиотерапевтических, хирургических и других методов лечения с целью профилактики и

Из книги Победа разума над медициной. Революционная методика оздоровления без лекарств автора Лисса Рэнкин

Первая медицинская помощь Первая медицинская помощь оказывается на поле боя или в очаге массовых санитарных потерь в виде само- или взаимопомощи, а также санинструкторами и санитарами-стрелками. Но время локальных конфликтов она может оказываться фельдшером и даже

Из книги Художники в зеркале медицины автора Антон Ноймайр

Медицинская ворожба После того как на уровне подсознания вы сменили верования, мы оптимизируем культуральную среду для клеток, из которых состоит ваше тело, и таким образом меняем способы экспрессирования ДНК. Мы не жертвы собственных генов. Мы властители своей

Из книги Ребенок и уход за ним автора Бенджамин Спок

Из книги Умный пациент. Как выйти здоровым из больницы автора Вячеслав Архипов

Медицинская помощь 47. Родильный дом.В наше время преобладающее большинство женщин рожает в родильных домах, где всегда рядом опытные врачи, сестры, няни. В родильном доме имеется все необходимое оборудование, включая такие сложнейшие приспособления, как инкубаторы,

Из книги Пиявки: домашняя гирудотерапия автора Геннадий Михайлович Кибардин

10 ВАША МЕДИЦИНСКАЯ КОМАНДА Пациенту, для того чтобы включиться в процесс оказания ему медицинской помощи, необходимо знать, с кем он имеет дело, кто эту помощь ему оказывает. Большинство больных, пребывающих в патерналистской модели взаимоотношений с медицинскими

Из книги автора

Медицинская пиявка Пиявка существует уже миллионы лет, судя по всему, она ровесница многочисленных динозавров, заселявших нашу Землю и вымерших по неизвестной причине миллионы лет тому назад. За долгие годы эволюции пиявки совершенствовали одну свою важную функцию –

Получив достаточно информации о мире микроорганизмов, мне стало интересно на них посмотреть, и увидеть, на конкретных примерах, как они работают (Приложение 3 ).


Для этого я решила провести ряд экспериментов. Быстрее всего дождаться результата, оказалось, от деятельности дрожжей.

Полезное применение микроорганизмов на примере дрожжей.

Замесила две порции теста: одна порция дрожжевого, другая без добавления дрожжей и испекла булочки.

через 20 минут дрожжевое тесто стало подниматься, т.е. началась работа микроорганизмов, а обычное тесто осталось без изменения. Пирожки из дрожжевого теста получилась пышными, мягкими и вкусными, а булочки из теста без добавления дрожжей получились тяжелые и плоские.

Вывод: дрожжи вырабатывают углекислый газ, в результате этого тесто «растет» поднимается, становится пышным.

Наблюдение за молоком (опыт взят из моего прошлогоднего проекта!).

Я поставила два стакана с молоком в холодильник, и два стакана оставила на сутки на батарее (по одному стакану с пастеризованным и кипяченым молоком).

пастеризованное молоко на батарее скисло на второй день, на третий день скисло кипяченое молоко на батарее, затем на седьмой день скисло пастеризованное молоко в холодильнике, на девятый день скисло кипяченое молоко в холодильнике! (Таблица 1).

Приложение 3. Таблица 1

Наблюдение за молоком
(Опыт 2)

Вывод: бактерии гниения испортили молоко, а бактерии молочнокислого брожения превратили его в простоквашу, которую можно употреблять в пищу. В холодильнике дольше хранится кипяченое молоко, а быстрее скисает пастеризованное.

Я увидела, как действуют молочные микроорганизмы.

Получение сметаны из сливок.

Взяла сливки и поставила их в теплое место.

через день получила сметану, даже не взбивая.

Вывод: сливки быстро скисают в теплом месте в открытой емкости.

Таким образом, я убедилась, что «полезные» микроорганизмы помогают сделать многие продукты вкусными и полезными!

Определение микроорганизмов при наличии консервантов в питательной среде.


Я создала питательную среду для размножения бактерий (сварила «живой бульон» и бульон из куриного кубика «Knor», добавила в него сахар). Разлила по четырем пробиркам. Пробирки пометила цветом, и пронумеровала. Первую (синюю и красную) пробирку оставила чистой, а во вторую (синюю и красную) опустила палец. Все пробирки закрыла крышкой, и поставила в теплое место (Таблица 2 ).

Таблица 2

Определение микроорганизмов
при наличии консервантов в питательной среде
(Опыт 4)

Дата (период появления микро-организмов) Маркированная проба с питательной средой (описание)
1 2 1 2
Бульон «Knor» (синий) «Живой» бульон (синий) Бульон «Knor» (красный), палец «Живой» бульон (красный), палец
08.01.2017 – 10.01.2017
(2 дня)
помутнение бульона
08.01.2017 – 11.01.2017
(3 дня)
появился неприятный запах
08.01.2017 – 12.01.2017
(4 дня)
появилась пена появился незначительный осадок появились пятна плесени появился осадок
08.01.2017 – 13.01.2017
(4 дня)
- - пятна плесени увеличились в диаметре
08.01.2017 – 16.01.2017
(7 дней)
- количество осадка увеличилось пятна плесени продолжают расти увеличение осадка в два раза

через два дня жидкость в сосудах помутнела, через 3 дня стала издавать неприятный запах. Я обратила внимание на то, что на четвертый день во всех образцах с «живым» бульоном появился осадок, причем в образце с опущенным пальцем осадка оказалось больше.

В пробирках с бульоном из кубика изменения начали происходить на поверхностной пленке каждого из образцов, но в образце с опущенным пальцем на поверхности начала образовываться плесень.

Получается, что микроорганизмы присутствуют во всех четырех пробах, но в разном количестве (это еще раз подтверждает тот факт, что на наших руках обитают бактерии), однако в пробирках с опущенным пальцем процесс размножения микроорганизмов происходит в несколько раз быстрее.

После этого я взяла несколько капель жидкости из пробирок и попыталась рассмотреть их под микроскопом, насколько это оказалось возможным. В образцах с «живым» и «неживым» бульоном были обнаружены разные виды микроорганизмов.

Вывод: во всех образцах подтвердился факт наличия в жидкости микроорганизмов. Странным мне показался факт размножения микроорганизмов в среде с консервантом. Ведь считается, что в таких условиях микроорганизмы не должны выживать, консервант их должен убивать. Объяснить такое поведение микроорганизмов я могу лишь истечением срока годности бульонного кубика, ведь врачи не рекомендуют употреблять продукты питания после истечения срока годности!

Определение благоприятных условий для развития и размножения бактерий.

Взяла два кусочка хлеба и поместила их в плотно закрытые полиэтиленовые пакеты. Один положила в холодильник, другой – в теплое место, на подоконник, где всегда солнышко.

через три дня я заметила, что на пакете, с опытным образцом, который находился в тепле, выступили капли воды, а еще через день стали образовываться пятна плесени (Таблица 3 ).

Таблица 3

Наблюдение за хлебом
(Опыт 5)

Вывод: на корочке хлеба появилась плесень – мукор . Микроорганизмы вызывают порчу продуктов! Плесень может развиваться только в теплом и влажном месте, особенно богатом питательными веществами, а сухость воздуха и низкая температура являются главными препятствиями для развития плесени.

Следовательно, с большой долей вероятности можно предположить, что и «плохие» микроорганизмы предпочитают развиваться в теплой влажной среде.

Наличие микроорганизмов на немытых и мытых руках.

В две чистые чашки положила питательную среду: вымытый клубень картофеля очистила, разрезала пополам, и вымочила 2-3 ч. в растворе соды (1 ч.л./500 мл. воды), затем сварила его и разрезала на лом-тики. Прикоснулась немытыми руками к одному пласту картофеля, а затем мытыми к другому. Закрыла чашки крышками, и поставила в темное теплое место на 4 дня.

через четыре дня на ломтике картофеля, к которому прикасалась грязными руками, вы-росли бактерии (Таблица 4 ).

Таблица 4

Наличие микроорганизмов на немытых и мытых руках
(Опыт 6)

пробы Наименование исследуемого объекта 1 день (02.01.2017) 3 день (04.01.2017) 5 день (06.01.2017)
1 Ломтик картофеля (чистые руки) - при взаимодействии пигмента с щелочью (мыло) образуется оранжево-желтая окраска, поэтому на данном образце появился налет желтого цвета, а красного пигмента не обнаружено -
2 Ломтик картофеля (грязные руки) - появились пятна желто-оранжевого цвета (кокки), и красный пигмент характерный для крахмалсодержащих продуктов продигиозин , который вырабатывают бактерии «чудесной крови», не патогенны, но продукты их жизнедеятельности являются токсичными пятна плесени стали крупнее и ярче

Вывод: микроорганизмы не любят чистоту, мыло их убивает!

Наличие микроорганизмов на предметах.

Взяла ватной палочкой пробу с перил лестничной клетки своего подъезда. Образец поместила в пробирку с питательной средой («живой» бульон), и убрала в теплое, темное место.

через один день произошло изменение цвета, что говорит о присутствии вредных бактерий, а через три дня выпал белый творожистый осадок - колонии бактерий (Таблица 5 ).

Таблица 5

Наличие микроорганизмов на предметах
(Опыт 7)

Вывод: на предметах вокруг нас очень много различных микроорганизмов, не всегда полезных, поэтому необходимо мыть руки!

Проделанные опыты подтверждают факт существования вокруг нас огромного количества различных микроорганизмов, которые, к сожалению, не всегда бывают «хорошими».

Микроорганизмы, или микробы - это живые существа микроскопически малых размеров, которыми насыщена окружающая человека среда: вода, почва, воздух, продукты питания, жилища человека и предприятия.

Наука микробиология изучает строение, обмен веществ и условия существования микроорганизмов, а также их роль в жизни человека. Микроорганизмы имеют сходство с животными и растениями, так как находятся на границе животного и растительного миров. Они очень разнообразны по форме и свойствам, но общим признаком всех являются малые размеры. Поэтому для изучения их применяются особые методы. Из-за малых размеров микроорганизмы невозможно увидеть невооруженным глазом. Знакомство человека с ними началось с изобретения микроскопа. Первые микроскопы были весьма примитивны, состояли из нескольких вручную изготовленных линз и давали увеличение до 300 раз; по существу, это были лупы. Однако даже такие приборы позволяли рассмотреть форму некоторых микроорганизмов.

Голландский естествоиспытатель Антон Лёвенгук (1632-1723), собственноручно шлифовавший линзы и собиравший простейшие микроскопы, с удивлением обнаруживал микроорганизмы во всех объектах, которые рассматривал: дождевой воде, настое сена, зубном налете и др. Он с большой точностью описал формы микроорганизмов, которых увидел под микроскопом (простейшие, бактерии, грибы и дрожжи), назвал их инфузориями и описал в книге «Тайны природы». Лёвенгука по праву считают основоположником описательной микробиологии.

Со времени открытия Лёвенгука многие ученые стремились глубже изучить свойства микроорганизмов и использовать полученные знания в хозяйственной деятельности. Огромны заслуги перед человечеством знаменитого французского ученого Луи Пастера (1822-1895). Начав работу химиком, Пастер впоследствии заинтересовался обменом веществ у микроорганизмов. Пастер обратил внимание на то, что на поверхности земли благодаря наличию микроорганизмов происходят значительные химические превращения: микроорганизмы не только разрушают мертвые органические остатки животных и растений, но и очищают от них почву и водоемы.

Пастер доказал, что в результате деятельности отдельных видов микроорганизмов происходит порча пищевых продуктов. Одновременно он обнаружил, что микроорганизмы производят и полезную для человека работу. Исследуя процессы брожения, Пастер установил, что каждое брожение (спиртовое, уксуснокислое и молочнокислое) вызывается специфическим возбудителем. В своем труде «Исследование о брожении» он рассматривает ряд бродильных производств, приписывая осадку на дне бродильного чана главную роль в процессе брожения. До Пастера, например, осадки в винных бочках считали отбросами и называли «экскрементами вина». Исследования Пастера оказали большую помощь виноделам Франции в борьбе с микроорганизмами, вызывающими болезни вин, и он по праву считается родоначальником технической микробиологии. Позже Пастер увлекся бактериологией и разработал учение о специфичности возбудителей инфекционных заболеваний человека, которые тоже оказались микробами, а также создал прививку против бешенства.

Русские ученые сыграли большую роль в развитии микробиологии. Среди них наиболее известны Л. С. Ценковский, И. И. Мечников, Н. Ф. Гамалея, Д. И. Ивановский, С. Н. Виноградский, В. Л. Омелянский и др.

Л. С. Ценковский (1828-1877) исследовал различные группы микроорганизмов, их свойства и генетическую связь друг с другом. Он был первым, кто приготовил и применил в России вакцину против сибирской язвы овец.

И. И. Мечников (1845-1916) получил всемирное признание за разработку теории иммунитета. Она объясняет механизм невосприимчивости организма к инфекционным заболеваниям. После дальнейшей разработки эта теория легла в основу учения об антибиотиках.

Н. Ф. Гамалея (1858-1949) изучал многие вопросы медицинской микробиологии. В 1886 г. Н. Ф. Гамалея организовал в Одессе первую в России пастеровскую станцию по прививкам против бешенства.

Д. И. Ивановский (1864-1920) первым открыл вирусы, вызывающие болезни растений. Он является родоначальником науки вирусологии, которая в настоящее время получила широкое развитие и применение.

Большой вклад в развитие микробиологии внес С. Н. Виноградский (1856-1953), разработавший метод элективных (избирательных) культур. Используя его, С. Н. Виноградский выделил группу нитрифицирующих бактерий, открыл особый тип питания у микробов - хемосинтез. Он обнаружил также важнейший процесс - фиксацию атмосферного азота анаэробными бактериями, - имеющий огромное значение в круговороте веществ в природе.

Ученик С. Н. Виноградского - В. Л. Омелянский (1867-1928) многое сделал для развития микробиологии. Он создал первый русский учебник и практическое руководство по микробиологии. Грибные заболевания растений исследовали М. С. Воронин (1838-1903) и А. А. Ячевский (1863-1932), положившие начало науке фитопатологии.

В изучение процессов брожения большой вклад внесли русские ученые Л. А. Иванов, С. П. Костычев (1877-1931) и А. Н. Лебедев (1881-1938). В 1930 г. на основе работ С. П. Костычева и В. С. Буткевича (1872-1942) в СССР было организовано производство молочной кислоты с помощью микроскопических грибов. Труды Я. Я. Никитинского (1878-1941) и его учеников положили начало развитию микробиологии консервного производства и хранения скоропортящихся пищевых продуктов.

В нашей стране микробиология пищевых продуктов получила широкое развитие. Как наука микробиология разделяется на самостоятельные разделы.

Общая микробиология изучает различные стороны жизнедеятельности микробов, роль их в круговороте веществ в природе и возможность применения в практической деятельности человека. Наиболее важной функцией микробов для жизни на земле является их участие в круговороте углерода. Равновесие между образованием органических соединений растениями и их распадом поддерживают микроорганизмы. Общая микробиология изучает круговорот и других жизненно важных элементов в природе, связанных с жизнедеятельностью микроорганизмов: азота, железа, серы и др.

Техническая микробиология является важной прикладной наукой. Она изучает различные микроорганизмы с точки зрения использования их биохимической деятельности для получения ценных продуктов. Оказалось, что некоторые дрожжи, бактерии и плесневые грибы в процессе своей жизнедеятельности образуют много полезных веществ. Благодаря исследованию ряда ученых в настоящее время разработаны технологические процессы для использования биохимической деятельности микроорганизмов. Так, вырабатывают пиво, вино, сыр, хлеб, спирт, органические кислоты и т. д. Успех этих производств зависит от правильно подобранных культур микроорганизмов и режимов их выращивания. Важным условием получения продуктов высокого качества является применение чистых культур микроорганизмов - культур, которые выведены из одной клетки и обладают рядом производственно-ценных свойств.

В последние десятилетия освоено производство многих новых ценных продуктов микробиального происхождения: антибиотиков, витаминов, ферментов, аминокислот и др.

Продуцентами их являются дрожжи, бактерии, плесневые грибы и другие микроорганизмы. Возникла и стала быстро развиваться новая отрасль народного хозяйства - микробиологическая промышленность.

Сельскохозяйственная микробиология разрабатывает способы повышения плодородия почвы с помощью микроорганизмов.

Медицинская микробиология изучает болезнетворные (патогенные) микроорганизмы, методы предупреждения болезней и их лечение. К ней примыкают санитарная и ветеринарная микробиология, эпидемиология и вирусология.

Санитарная микробиология - это наука, разрабатывающая оздоровительные мероприятия для предупреждения различных заболеваний человека. Санитарная микробиология находится на стыке с микробиологией, эпидемиологией и гигиеной и имеет профилактическую направленность. Вначале санитарная микробиология составляла часть гигиены, но в 30-е годы благодаря трудам советских ученых А. Л. Миллера, И. Е. Минкевича, В. И. Тец сформировалась как самостоятельная наука.

Водная микробиология изучает микроорганизмы, населяющие водоемы. Она занимается также вопросами загрязнения вод промышленными отходами, очищения вод с помощью микроорганизмов и др.

Кроме полезных микроорганизмов, которые люди научились использовать в своих целях, в природе существует огромное количество вредных. Попадание их в пищевые продукты и полуфабрикаты нежелательно и опасно, поскольку некоторые микроорганизмы являются возбудителями пищевых инфекций и отравлений. Доброкачественность пищевых продуктов во многом зависит от вида и количества микроорганизмов, находящихся в окружающей среде, сырье и на производственном оборудовании. Качество продукции определяется тем, насколько удалось предотвратить микробиальное обсеменение растительного и животного сырья при транспортировании, хранении, технологической обработке. Поэтому на пищевых предприятиях постоянно контролируют микробиологическое состояние производства, что позволяет своевременно обнаружить посторонние и вредные микробы. В этих целях наряду с химической лабораторией устраивают микробиологическую, которая имеет специальное оборудование.

Автоклавы предназначены для получения стерильных питательных сред, на которых выращивают микроорганизмы. В этих аппаратах, работающих под давлением, стерилизующим фактором является влажный пар при температурах выше 100 °С. Стеклянная посуда (пробирки, пипетки, чашки Петри, бродильные трубки для определения активности брожения и др.) стерилизуется в сушильных шкафах сухим паром при 160-170 °С.

Микроскопы позволяют рассматривать клетки микроорганизмов, невидимые невооруженным глазом. При этом для выявления строения клеток используют специальные краски. Кроме основного оборудования необходимы лабораторные принадлежности: петли для проведения посевов микроорганизмов на поверхности питательных сред, иглы для посевов в глубину сред и др. В тех отраслях, где применяются культурные микроорганизмы, необходимо специальное оборудование и посуда для разведения чистых культур.

Для предупреждения попадания вредных микробов в технологические емкости, полуфабрикаты и готовую продукцию разработаны профилактические мероприятия и санитарные правила. Вредные микробы подвергаются также активному уничтожению при проводимых на предприятиях дезинфекциях.

Важным средством борьбы с микробиальной обсемененностью на предприятиях является переработка сырья, минимально зараженного микробами, содержание в чистоте оборудования и тары и строгое соблюдение установленных технологических режимов, которые обеспечивают условия, неблагоприятные для размножения посторонней микрофлоры.

Для изучения различных свойств микробов в микробиологии разработан метод искусственного выращивания их на специальных средах. Микроорганизмы в природных условиях обычно находятся в виде сообществ различных видов. Точное изучение отдельных видов возможно только при выделении их в чистых культурах, т. е. в культурах, содержащих лишь один вид микробов.

Пастер впервые разработал специальные методы исследования микробов. Он ввел методы стерилизации, без которых невозможно выделение чистых культур, получение на искусственных питательных средах культур бактерий, экспериментальное заражение животных и др. Пастер получал культуры бактерий при помощи последовательных разведений взвеси микробов в стерильной питательной среде из пробирки в пробирку, пока в последней не останется одна клетка. Этот несовершенный метод в руках Пастера давал хорошие результаты даже при приготовлении вакцин.

Дальнейшее усовершенствование методов бактериологического исследования принадлежит крупнейшему немецкому ученому Р. Коху (1843-1910). Он для выделения чистых культур применил твердые искусственные питательные среды, из которых особенно удачными оказались агаровые среды. Методика, разработанная Кохом, позволила в течение двух десятков лет открыть возбудителей большинства важнейших заболеваний человека, вызываемых бактериями.

В настоящее время пользуются естественными и искусственными средами, жидкими и плотными. К естественным средам относятся: обезжиренное молоко, неохмеленное сусло, отвары гороха, кусочки картофеля и др. Искусственных сред очень много. Для гетеротрофных бактерий пользуются средами с пептоном. Пептон - продукт неполного расщепления животных белков. Такова пептонная вода (1 г пептона, 0,5 г поваренной соли на 100 мл воды). В мясопептонном бульоне (МПБ) то же количество пептона и соли прибавляется к мясному бульону, из которого осаждены белковые вещества. Эти жидкие среды можно сделать плотными, если прибавить к ним 1-3% пищевого агара. Агар - полисахарид, добываемый из морских водорослей. Ценность его в том, что агаровая среда застывает в виде прозрачного студня и не разжижается, если нагревать его не до кипения. Для более требовательных микробов, особенно болезнетворных, прибавляют к этим простым средам глюкозу, кровь, сыворотку ее, витамины и пр. Среды должны иметь определенную реакцию (рН), должны быть стерильны. Посевы выращиваются при определенной температуре. Для получения чистой культуры из исследуемого материала делают несколько, обычно три, последовательных разведений в пробирках с расплавленной и остуженной до 40° агаровой средой. После тщательного размешивания (путем вращения пробирки ладонями) содержимое каждой пробирки выливают в чашки Петри. Через несколько часов или дней на плоской поверхности агара в чашках появляются колонии. Предполагается, что колония развивается из одной микробной клетки. Из колоний выбирают наиболее изолированные и типичные и отсевают в пробирки на косой агар, на котором и вырастает чистая культура. Можно высевать материал непосредственно на поверхность агаровой среды, налитой и застывшей в чашке Петри. Во многих случаях получаются хорошие колонии при посеве петлей на поверхности агара в одной чашке. Материал берется петлей и ею проводят по поверхности агара штрихи в продольном и поперечном направлении. В последних штрихах обычно получают достаточно отдельных колоний. С. Н. Виноградский предложил метод элективных культур для выделения и изучения физиологии почвенных микробов. Для получения таких культур применяются среды, состав которых удовлетворяет потребность в питательных веществах одной какой-либо группы микроорганизмов. На таких средах развиваются не все микробы, а лишь те, для жизнедеятельности которых эти среды окажутся благоприятными. Другие микробы или совсем не будут расти, или растут очень слабо. При повторном посеве последние микробы будут вытеснены первыми.

Так, при изучении процесса нитрификации Виноградский отказался от применения пептонных сред и применил синтетическую среду, которая содержала аммонийную соль как единственный источник азота и не содержала никаких источников углерода. Состав среды:

(NH 4) 2 SО 4 - 0,2%; K 2 HPO 4 - 0,l%; MgSО 4 ·7H 2 О - 0,05%; NaCl - 0,2%; FeSО 4 - 0,4%; CaC0 3 - 0,1%

на 100 мл воды. На этой среде впервые были получены нитрифицирующие бактерии.

Для выделения чистой культуры С. Н. Виноградский предложил твердую синтетическую среду. Путем смешивания жидкого стекла и соляной кислоты получаются пластинки прозрачного кремнекислого студня. Кремнекислые пластинки пропитываются соответствующей жидкой питательной средой.

Виноградский считает, что природные почвенные микробы отличаются от культурных форм, которые он называл тепличными, одомашненными организмами. Поэтому он рекомендует изучать самопроизвольные спонтанные культуры, полученные на пластинках кремнекислого геля путем непосредственного посева на них мелких комочков естественной почвы. Гель очень легко пропитывается всевозможными растворимыми питательными веществами, которые так же легко используются организмами, как и из жидкой среды. Этот метод культивирования применяется для выделения видов со специфическими функциями, но может применяться и к обычным бактериям. Так, азотобактер выделяется на кремневом геле, пропитанном слабым раствором бензоата натрия или лактата кальция и минеральными солями. Если засевать чашки мельчайшими комочками почвы, разложенными на геле в определенном порядке, то можно не только определить рост специфических культур в почве, но и одновременно судить о числе соответствующих форм микробов.

С. Н. Виноградский также разработал микроскопический метод определения числа бактерий в почве при помощи непосредственного их подсчета. Для этого готовят микроскопические препараты из определенного по весу или объему количества почвенной суспензии. Мазки окрашивают карболовым эритрозином. При отмывании мазка водой коллоиды почвы обесцвечиваются, а бактерии остаются окрашенными в красный цвет, и делается их подсчет. Этот метод показал, что число бактерий в грамме почвы исчисляется не сотнями тысяч, а сотнями миллионов

Виноградский своими работами заложил прочные основы микробиологии почвы. Он по праву считается основателем почвенной микробиологии.

Очень плодотворным оказался метод качественного учета микроорганизмов в почве, предложенный крупным советским ученым Н. Г. Холодным и названный им методом обрастания стекла. В почве делается ножом разрез, одну из стенок срезают наиболее ровно. Обезжиренное предметное стекло плотно прикладывают к этой стенке и закапывают его землей на несколько дней или недель. За это время происходит обрастание стекла микроорганизмами почвы, находящимися в соприкосновении с ним. Затем стекло откапывается, окрашивается карболовым эритрозином. Этот метод дает возможность непосредственно под микроскопом наблюдать естественное расположение микробов в почве, их форму и размеры, группировки и количественное их соотношение - то, что Н. Г. Холодный называет естественным ландшафтом почвенной микрофлоры.

Б. В. Перфильев и Д. Р. Габе разработали совершенно новый метод капиллярной микроскопии. Материал из ила или почвы набирается в стеклянные капилляры с плоскими стенками и прямоугольными просветами канала капилляров. Эти капилляры прикрепляются к стеклянным держателям для взятия проб в иле. Для взятия проб из почвы капилляры помещаются в особый металлический пробойник. В таких плоских капиллярах очень удобно микроскопировать в сухие и иммерсионные объективы целые микробные пейзажи ила или почвы, наблюдать развитие микробов. В таких капиллярах под микроскопом ученые находили участки, где имелась только одна клетка, которая извлекалась из капилляра и изучалась далее. При помощи этого метода они открыли мною новых микробов, особых хищных колониальных бактерий.

Определение вида микробов. Для этого определяют морфологические, культуральные и физиологические признаки выделенного вида. Для изучения морфологии микроба определяют форму клеток, их сочетания, наличие спор, жгутиков, включений. Во многих случаях имеет значение отношение к окраске по Граму и некоторые специальные окраски, например окраска туберкулезной палочки. Но необходимо отметить, что морфологические признаки у микробов довольно однообразны, по ним часто нельзя отличить один вид от другого. Решающее значение имеют культуральные признаки (характер роста на питательных средах) и различные физиологические признаки.

Из культуральных признаков различают: характер роста на жидких средах, например на мясопептонном бульоне (общая муть, пленка, осадок на дне и пр.); характер роста колоний и чистых культур на плотных средах, агаровых и др. В колониях различают особенности поверхности колоний (гладкая, шероховатая, выпуклая, бугристая), краев ее (ровные, зубчатые и др.), цвет, размеры колоний; характер роста на косом агаре, картофеле, желатине и других плотных средах.

Из физиологических признаков наиболее важно отметить следующие:

1. Отношение бактерий к различным источникам углерода: к гексозам (глюкоза, левулеза, галактоза и др.), дисахаридам (сахароза, мальтоза, лактоза), пентозам (арабиноза, ксилоза), многоатомным спиртам (маннит, дульцит, глицерин), органическим кислотам. При этом отмечают образование кислоты и газа.

2. Отношение к источникам азота (пептон, аспарагин, аммиачные и азотнокислые соли, разные аминокислоты). Определяют образование аммиака, сероводорода, индола, нитритов и др. Эти признаки определяют на жидких средах (пептонной воде) или на синтетических средах, к которым добавляют указанные источники углерода и азота.

3. Отношение к кислороду. Наиболее простой способ - посев уколом в высокий столбик агара в пробирке. Аэробы развиваются в верхней части укола, факультативные анаэробы - в средней и по всей части укола, а строгие анаэробы растут в нижней части. Есть и другие специальные способы.

4. Рост на молоке (свертывание, пептонизация, отсутствие изменений) и на желатине (разжижение и характер этого разжижения).

Для некоторых видов делают еще другие исследования. Ключ к определению видов на основании найденных признаков культуры дают специальные определители бактерий, например Красильникова или Бердже.

Для изучения микробов необходимы соответствующие лабораторная обстановка и оборудование. Помещение для лабораторий подбирают просторное, светлое, чистое и изолированное. Работа в лаборатории требует особой осторожности, так как приходится работать с заразным материалом. Микроскопирование. Вследствие очень малых размеров микроорганизмы изучают с помощью специальной аппаратуры - микроскопов.

Микроскоп состоит из двух частей: механической и оптической. Механическая часть микроскопа состоит из штатива, тубyca 7 (рис. 6), «револьвера» 2, предметного столика 4, микрометрического 10 и макрометрического 11 винтов. К оптической части относятся объективы 3, окуляры, зеркала 6, осветительный аппарат 5 (конденсор). Оптическая часть - наиболее важная часть микроскопа. Под предметным стеклом находятся зеркало и конденсоры. Зеркало служит для отражения (???) направления световых лучей через конденсор в объектив. Конденсор состоит из нескольких линз, которые собирают отраженные от зеркала лучи на уровне исследуемого предмета. На нижней поверхности осветительного прибора укреплена ирис-диафрагма, с помощью которой можно уменьшать или увеличивать освещение изучаемого предмета. Объектив состоит из нескольких линз, заключенных в общую металлическую оправу, на которую наносится цифра, указывающая увеличение. Окуляр состоит из двух линз и дает увеличение изображения, которое получается (???) от объектива. На окуляре также имеется цифра, указывающая увеличение. Общее увеличение микроскопа равно произведению увеличения объектива на увеличение окуляра.
Разрешающая способность микроскопа ограничивается длиной световой волны.

Имеются микроскопы более усовершенствованных конструкций. Так, в бинокулярных микроскопах предметы рассматриваются обоими глазами, благодаря чему получается более рельефное изображение объектов. Сконструированы ультрамикроскопы, предназначенные для рассматривания объектов, имеющих размеры менее 0,2 мк. Предметы в этих микроскопах освещают не проходящими лучами, как в обычном микроскопе, а боковыми, исходящими от сильного источника света.

Электронный микроскоп, дающий увеличение от 20 000 до 200 000 раз и более, был изобретен в 1932 году. При его помощи можно изучать такие микроорганизмы, как вирусы, имеющие размеры в несколько миллимикрон. В этих микроскопах через изучаемый предмет пропускается поток быстролетящих электронов, причем изображение получается на специальном экране.
В последние годы, кроме описанных выше, стали внедряться практику также люминесцентные фазово-контрастные микроскопы, применение которых расширило возможности изучения микроорганизмов. Так, при люминесцентной микроскопии изучаемый предмет освещается ультрафиолетовыми лучами от специального источника. При этом некоторые микробы, поглощающие энергию, могут затем давать видимое цветное (зеленое, желтое, фиолетовое) излучение. Таким образом, в отличие от обычной микроскопии в люминесцентном микроскопе рассматривают объекты в излучаемом ими свете. В фазово-контрастном микроскопе более четко изучается внутренняя структура живых клеток в процессе жизнедеятельности и функция движений. Это достигается с помощью специально устроенных фазовых (кольцевых) объективов и конденсора. Они изменяют фазу волны проходящего света, резко повышая контрастность изображения. Питательные среды. Для исследования разнообразных свойств микробов их выращивают на питательных средах. Чтобы микробы могли размножаться, такая среда должна содержать достаточное количество питательных веществ, воду, минеральные соли и источники азота и углерода. Особое внимание обращают на то, чтобы среда для выращивания микробов была стерильной, так как загрязнение питательной среды делает ее непригодной для использования.

Различают естественные и искусственные питательные среды. В качестве естественных питательных сред применяют молоко, желчь, картофель, морковь, яйца и др. .Искусственные питательные среды готовят в основном из мясных или растительных настоев, добавляя в них различные азотистые продукты, углеводы и соли.

Подопытные животные. Роль отдельных микробов в возникновении заболеваний, изучение характера инфекционного процесса, метода лечения и профилактики многих инфекционных заболеваний были выяснены благодаря широкому использованию в микробиологии метода экспериментального заражения подопытных животных.

Из лабораторных животных в микробиологической практике наиболее широко используют морских свинок, кроликов, белых мышей, белых крыс, иногда - обезьян, мелкий и крупный рогатый скот, кошек, собак и редко птиц (голубей, кур). Выбор того или другого животного для исследования зависит от двух условий: во-первых, животное должно быть восприимчиво к данной инфекции, во-вторых, в естественных условиях у него не должно быть данной инфекции. Поэтому для изучения каждой инфекции используют отдельный вид животного. Например, при изучении туберкулеза и дифтерии подопытными являются морские свинки, при изучении бешенства - кролики и др.



Похожие статьи